REAKTIONSEINSTELLUNG
1)Alle Reaktionskomponenten vollständig auftauen und vorsichtig mischen, um eine gleichmäßige Verteilung aller Komponenten zu gewährleisten.
Bereiten Sie die Reaktion auf Eis in einem sterilen, nukleasefreien Röhrchen vor und mischen Sie sie nach Zugabe der Polymerase vorsichtig.
Sammeln Sie die gesamte Flüssigkeit am Boden des Röhrchens durch schnelles Drehen.
KOMPONENTE VOLUMEN FINAL CONCENTRATION
10X PCR Buffer 5 µl 1X
dNTP Mix (10 mM each) 0.5 µl 0.1 mM each
Primer 1 (10 µM) 1 µl 0.1 µM – 0.5 µM
Primer 2 (10 µM) 1 µl 0.1 µM – 0.5 µM
LabQ Taq DNA Polymerase (5 U/µL) 0.2 µl 1 U
template DNA 1 µl <1 µg
dH2O to 50 µl
2) Bewahren Sie die Reaktionen bis zur Übertragung in den Thermocycler auf Eis auf und zyklieren Sie dann gemäß diesen Richtlinien:
STEP ZYKLUSLÄNGE TEMPERATUR DAUER
Initial Denaturation 1 94°C 5 minutes
Amplification 30-35 94°C 30 seconds
Tm – 5°C 30 seconds
72°C 1 minute / kb
Final Extension 1 72°C 5 minutes
Hold 1 4°C
3) Analysieren Sie die Amplifikationsreaktion durch Gelelektrophorese unter Verwendung eines geeigneten Acrylamid- oder Agarosegels
Prozentsatz.